13、高级功能:Z-Stack、Tiles、Time Series(该篇目之前的流程每次都要做)
(2)Tiles
在“Tiles”模块下“Tiles”方法代表以当前视野为中心拍摄拼图, 适合样品较大一个视野拍不下时需要拍下全貌的场景。
1、选择“Tiles”下的“Tiles”方法;
2、“X”&“Y”分别代表水平和垂直方向拼图范围(3 * 3 或者 3 * 4 都可以);
3、点击“+”,将要拼图的范围添加到拼图区域中;
4、“Start Experiment”(高级功能拍摄照片都是点击它);
“Tiles”方法代表以当前视野为中心拍摄拼图
5、拍摄完成后,因为拼图衔接部分有拼痕,因此需要对图片进行进一步处理。
左上角“Processing”下面“Method”这一栏,选择“Stitching”;
“Method”这一栏选择“Stitching”
接着下拉到“Parameters”参数,点击“New Output”新生成图片,再 √ 上“Fuse Tiles”去掉拼痕,最后点击上方的“Apply”。
Parameters
“Stake”方法能够通过定义拼图边缘自动计算拼图大小完成拼图,适合不确定需要多少张拼图足够拍下全貌的场景,可以一边预览一边调节拍摄范围。
1、“Stake”下通过移动载物台到想拼接的样品边缘,单击“+”,添加边缘范围。所有边缘定义后,点击“Done”,软件自动定义拼图范围(下图中例子显示总共需要拍 8 个 Tiles);
2、“Start Experiment”;
3、去拼痕处理同上。
“Stake”方法能够通过定义拼图边缘自动计算拼图大小
高级拼图功能“Advanced Setup”主要包括两个部分:
· 可以通过拼图前分析拼图区域的焦距变化,有利于校正拼图不同焦距的问题(support point);
· 如果同时配置有 CCD,可以通过 CCD 的快速成像来获取预扫图像,辅助拼图区域的选择(preview scan)。
1、建立好拼图范围后选择“Advanced Setup”,在右侧看见扫描区域,并进入下方选项“Support Points”;
建立好拼图范围后选择“Advanced Setup”
进入“Support Points”选项
2、在“Support Points”选项下选择支持点,这些支持点将帮助你确定拼图区域内的焦距变化;设定好需要分布的支持点的行列数量后点击“Distribute Support Points on Selected Tile Regions”。
点击“Distribute Support Points on Selected Tile Regions”
拼图区域上出现黄色小圆点,代表支持点,可以手动调节这些点的具体位置。
拼图区域上出现黄色小圆点
3、在“Tiles”窗口下选择“Focus Surface(verify) ”,点击“Verify Tile Regions / Positions”对选好的 support points 进行校正;
4、根据配置不同,主要包括以下三种校正方法:
a. None(Manual adjustment)手动校正,在预览模式“Live”下,双击第一个 SP(Support Point)进行手动调焦后保存焦距位置“Set Z & Move to Next”,随后对后续 SP 进行逐个校正;
b. Autofucus(AF)软件自动对焦,通过软件计算的方法找到最佳焦距;
c. Definite Focus(DF)自动对焦系统,需要硬件 Definite Focus 支持,通过 DF 能够迅速找到介质表面来确定样品焦面。
Verify Support Points
5、选择 AF 校正方法后选择“Use AF to Verify the Remaining”,软件会自动对所有 Support Points 进行焦距校正;
Autofocus Verify Support Points
6、选择 DF 校正方法后,
① 选择第一个”Support Point”点,点击“Move to Current Point”;
② 选择“Run DF and Set Z”,等待 Definite Focus 矫正结果;
③ 最后选择“Use DF to Verify the Remaining”,软件会自动对所有 Support Points 进行焦距校正。当校正 SP 结束后,选择“Close”关闭 Verify 窗口。
Definite Focus Verify Support Points
7、校正所有 SP 后,选择适合的“Interpolation Degree”;样品表面越不平整需要 Interpolation Degree 越高,选择的 SP 数量超过 Interpolation Degree 需要的最小值可以增加计算的可靠程度。
Definite Focus Verify Support Points
Definite Focus Verify Support Points
8、随后在“Focus Strategy”工具栏中确定如上图所示选项:对焦方法为“Use Focus Surface / Z Values Defined by Tiles Setup”, Focus Surface 的方法为“Local (per Region/Position)”;
9、上述设置结束后,点击“Start Experiment”拼图。
Definite Focus Verify Support Points