6、每一个通道进行预览,然后调节相应参数
(1)先选中一个通道,例如“mCherry",再点击左上角“Live”图像预览;
(2)可以通过鼠标双击的方式进行调焦或者调节视野位置。
· 比如把靠上的圈圈调到视野中间,双击圈圈,它会自动到整个预览视野的中间位置。
· 比如调节焦距,按住 Ctrl,调节鼠标的滚轮。调到你认为信号最亮,最清楚的层面。
(3)亮度是否合适?
小工具“Range Indicator”√ 起来,伪彩色的图像变成黑白
· 调节程度:调到刚刚出现一丢丢红点。
· 调整参数:“channels”选中“mCherry”的下面的参数都是针对 mCheny 来调节的。
①Pinhole 调整到 1AU(点-下 AU 会自动把 Pinhole 调节过来。例:对于 mCherry,1AU 的 Pinhole 大概是 39μm)。
· 增大 Pinhole 可以提高图像亮度,但会增加非焦面信息;
· 减少 Pinhole 有利于提升分辨率,但是会减少图像亮度。
②调节 Gain 值和激光强度,调到刚好出现一丢丢红点。可选择自接调节激光强度,也可以选择调节 Gain 值。
· 激光强度是激光打在你样品上,激光强度越强打出来的信号就越多。
· Gain 值是检测的光信号转化为电信号,然后再对它进行逐级放大。Gain 值提高,实际上就相当于对已有的信号进一步放大。
· 激光强度和 Gain 值两者效果不一样!
(Gain 值越高,整个图像的噪音越明显。因此 Gain 值不能超过 800,基本 700 左右就行)
Channels
设置原则保证图像不要过曝,尽量减少背景噪音。
在“Live”下选择“Range Indicator”可以显示出曝光程度