蔡司激光共聚焦荧光显微镜 (二)

6、每一个通道进行预览，然后调节相应参数

（1）先选中一个通道，例如“mCherry"，再点击左上角“Live”图像预览；

（2）可以通过鼠标双击的方式进行调焦或者调节视野位置。

· 比如把靠上的圈圈调到视野中间，双击圈圈，它会自动到整个预览视野的中间位置。

· 比如调节焦距，按住 Ctrl，调节鼠标的滚轮。调到你认为信号最亮，最清楚的层面。

（3）亮度是否合适？

小工具“Range Indicator”√ 起来，伪彩色的图像变成黑白

· 调节程度：调到刚刚出现一丢丢红点。

· 调整参数：“channels”选中“mCherry”的下面的参数都是针对 mCheny 来调节的。

①Pinhole 调整到 1AU（点-下 AU 会自动把 Pinhole 调节过来。例：对于 mCherry，1AU 的 Pinhole 大概是 39μm）。

· 增大 Pinhole 可以提高图像亮度，但会增加非焦面信息；

· 减少 Pinhole 有利于提升分辨率，但是会减少图像亮度。

②调节 Gain 值和激光强度，调到刚好出现一丢丢红点。可选择自接调节激光强度，也可以选择调节 Gain 值。

· 激光强度是激光打在你样品上，激光强度越强打出来的信号就越多。

· Gain 值是检测的光信号转化为电信号，然后再对它进行逐级放大。Gain 值提高，实际上就相当于对已有的信号进一步放大。

· 激光强度和 Gain 值两者效果不一样！

（Gain 值越高，整个图像的噪音越明显。因此 Gain 值不能超过 800，基本 700 左右就行）

 Channels

设置原则保证图像不要过曝，尽量减少背景噪音。

在“Live”下选择“Range Indicator”可以显示出曝光程度