蔡司激光共聚焦荧光显微镜 (一)

普通显微镜成像与共聚焦显微镜成像？

普通显微镜成像

共聚焦显微镜成像

1、开机顺序：1→2→3→4→5→6→7

①②——控制器，通电电源

③——激光器开关（转动钥匙）

④——汞灯电源（开关间隔 30min以上）

 金属卤化物灯“X-cite 120”

 金属卤化物灯“HXP 120”

⑤——显微镜开关

⑥——载物台开关

⑦——电脑开关

2、软件名称：ZEN

启动ZEN软件（Blue），选择“ZEN system”

 启动ZEN软件（Blue），选择“ZEN system”

Image Processing——图像处理，拷数据

ZEN System——拍照

打开之后 Initializing Hardware 硬件初始化，检测电脑跟显微镜是否连上。

报错“The Stogeand focsarenotyetcolibrated”，一般直接点“Skip Calibration”。

3、左边 Locate~定位

用眼睛观察，找视野

BF——明场

488——绿色，常见GFP、YFP、FITC

DAPI—— 蓝色，细胞核

RHE——红色，RFP，mCherry

4、Acquisition~图像获取，拍照

点 Smart Setup“智能设置”弹出一个对话框，点“+”添加标记的荧光染料/探针/荧光蛋白，找到之后双击加进列表。

三种拍摄方式：

A、Fastest

拍摄速度最快， 发射波长接近的荧光染料间存在串色现象；

B、Best signal

拍摄速度最慢； 基本避免了发射荧光的串色；

C、Smartest（Line）

结合上述两者优势，减少串色的同时拍摄速度较快，但是光路中硬件设置不能改变。

三种拍照方式中“Best Signal”是最常用的，速度比较慢，但效果最好。

5、整个操作界面在左边两列

（1）最左边这列“Imaging Setup”是光路图；

（2）右边这列“Acquisition Parameter”是需要调节的参数。其中“Acquisition Mode”拍照，“channels”通道设置图像亮度、信噪比和分辨率。

·“Channels”里面有刚添加的三个通道，选择任意一个通道，左边的光路可进行自动切换，因此一般不需要再自己进行修改光路。除非液流体的自发荧光或者一些有串色风险的，可以手动拖动接收范围。