双向荧光差异凝胶电泳(DIGE)简介

 　　随着科学技术的发展，荧光的应用更加的丰富多样，DIGE技术便是其中之一。DIGE(双向荧光差异凝胶电泳,Two-dimensional fluorescence difference in gel electrophoresis,2D-DIGE)，是在传统双向电泳的基础上发展而来的新型蛋白质组学定量技术，其分离蛋白的基本过程与传统双向电泳一致。但DIGE使用三种荧光染料（Cy2, Cy3和Cy5）标记不同组别的蛋白，并在同一张凝胶上对标记好的三组蛋白混合物进行电泳分离，是一种多通道分离技术。通常情况下，Cy3和Cy5分别标记两组蛋白，Cy2标记所有组别蛋白的混合物，作为内参使用。电泳分离后，在激光扫描仪中分别用相应波长的激光进行扫描，这样在同一张凝胶中便可得到三组蛋白的图谱。凝胶扫描后，用专用软件进行分析对比，运用特殊算法，给出准确可靠的定量信息。DIGE在实验中引入内参，有效地改善了实验的重复性，大大提高了定量的准确性。 

与传统双向电泳（银染或考染胶)相比，DIGE技术服务具有以下优势：

1、灵敏度高，最低可检测到125pg的蛋白质；

2、高效性，同一块凝胶上可以电泳两个样品，减轻了工作量；      

3、线性范围更广,动态范围高达10-5；      

4、定量精确, 采用内标消除了凝胶与凝胶之间的实验误差，显著提高了实验的精确度和可重复性。

5、统计学分析，DIGE分析软件自动分析，得到统计结果，降低了操作者之间的偏差。

图1：DIGE技术流程图.

　　DIGE技术流程：1、样品准备：提取对照组和不同实验组的蛋白质，定量，Cy3和Cy5标记蛋白，同时将所有实验组与对照组的样品等量混合后Cy2标记，作为内标。2、蛋白质分离：等量混合三种荧光素标记后的蛋白质，2D-PAGE电泳分离，荧光扫描。3、蛋白质定量分析：用DIGE图像分析软件分析同一蛋白质不同处理后的表达量变化。

　　双向荧光差异凝胶电泳的荧光扫描分析仪所使用的滤光片有：

Cy2激发滤光片波长480/30nm，发射滤光片波长530/40nm，扫描图像颜色为蓝色；

Cy3激发滤光片波长540/25nm，发射滤光片波长595/25nm，扫描图像颜色为绿色；

Cy5激发滤光片波长635/30nm，发射滤光片波长680/30nm，扫描图像颜色为红色。