综述文章

Gaining comprehensive biological insight into the transcriptome by performing a broad-spectrum RNA-seq analysis

标准数据

流程 & 实用工具

HISAT2- StringTie

序列比对

二代

STAR 唯一位置√ 容忍度高
TopHat 不允许soft-clip事件
HISAT2 最快

二三代混合

GMAP、STAR long

Exon-exon junction位点评估

HISAT2在所有样品中拥有最高的剪接点验证率 (80%-91%),TopHat其次 (54%-74%),STAR最低 (42%-54%)。但是HISAT2预测的剪接点的数量最少,约为TopHat的60%和STAR的50%。

基于参考基因组的转录组组装

二代

Cufflinks
StringTie

Cufflinks比StringTie更为准确和灵敏

三代

Iso-Seq

二三代混合

IDP

表达定量

StringTie

kallisto
Salmon-SMEM

变异位点

GATK

差异表达基因鉴定

DESeq2在所有组合中表现最佳,sleuth、edgeR和limma略微次之,但差别不大。

对于AUC-30的估计,edgeR表现最佳, DESeq2与之差别不大。

程序

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<说明>