单细胞测序
单细胞基因组学
测量理由是单细胞的时间空间特异性。
Gene expression&co-expression
比较正常cell与疾病cell,正常organ与疾病organ,看出偏差。
分离单细胞,破碎细胞,RNA逆转录,测量cDNA。
Eg:BAC扩增,可以实现bias很小的的genome,genome质量高。
Eg:对sperm cell进行single cell,
Eg:oocyte与sperm结合后,可以对过程中丢弃的部分进行single cell。
如果父源或母源中任何一方有过重组,则最后结合的细胞会发生突变。
Eg:在临床上解决家族遗传病。
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单细胞转录组
R1 +10X barcode+UMI+poly(dT)VN
先抓取,对RNA进行扩增,加接头,放入测序仪中测序。
10X genomics 技术流程,真正的单细胞,超高的细胞通量,细胞捕获效率高,性价比高。
Ps:现在最新的还有空间转录组
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应用实例:
Eg:研究衰老
Eg:生殖健康
Eg:描绘重编程
Eg:检测胚胎发育,到14
Eg:细胞水平成像,可以基于空间或者时间
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Gene editing:
zine finger protein
Talen用一个单元识别一个碱基。
Crispr
CRSIPR在2012年实现Mamalian cells。
来源于免疫系统,可以记录何种序列曾经入侵,然后针对该入侵序列制作剪切物质,通过该剪切物质能够对目标序列进行剪切。
参考:http://blog.sciencenet.cn/blog-3160644-983657.html
Genome editing类型:
CRISPR-CAS9
单个碱基Base editing
一小段碱基Prime editing
挑战:
Delivery是否能传递到目标位置。
因为剪切物是外源物质,考虑Immune system是否会影响该方法
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应用:
Eg:editing之后看表型变化,实践之后发现有很多indel,除去人为改变的位点之后,该位点周围的位点也会发生改变,比如RNA的改变。
Eg:流行病应用中发现Cas13的剪切不受控制,现在可以做放大信号的作用。
检测疾病标志物,然后放大。
Eg:发现重复序列,将其从中间切开然后part1与part2互补拼接。
Eg:将一大段DNA整合进入目标位置。
Eg:记录小鼠development的过程。