PCR概述及前沿技术
一、PCR
1.1 由于病毒比较小,采用免疫方式不好做,会采用基因方式,更深层的分析目标对象是否存在。
1.2 复制过程,升温降温一次为一个周期,dna复制一次,一般进行50次复制后单条dna将赋值为2的50次方条。
1.3 每个探针上都会有荧光物质,复制后进行光强检测得到数值,分析是否包含待测物质。
1.4 由于PCR结合存在错配情况,因此该方式不一定准确。
二、探针与发光
2.1 常规做法为制作与目标dna匹配的探针(dna段)试剂与目标反应,目标将与dna段结合复制。
2.2 探针反应前是环状,一端为荧光物质,另外一端为抑制荧光物质,收尾相连不发光,当结合后变为链状,荧光物质原理抑制荧光物质,之后发光。
三、荧光Digital PCR(数字PCR、绝对PCR仪)检测流程及原理
3.1首先将待测物质充分稀释并加入反应液(探针)
3.2 使用微流控技术,将其打散成50万个液滴(每个液滴平均只含有一个、两个、或没有dna),油包水的形式。此时扩增的纯度非常高。
3.3 进行30次PCR扩增。
3.4 将反应后的液滴均匀的滴在10w像素的芯片(光采集芯片)上,保证每个液滴对应一个像素点。
3.5 打入激光产生荧光,并进行芯片光信号采集。
3.6 采集信号分析,泊松分布分析。
四、硅芯片PCR(赛墨菲,半导体方案)
硅芯片上提供通道,液滴分赛在芯片中,通过芯片采集电信号强弱分析是否为目标待测物。
五、价格
最贵的PCR仪120万美元。
一般的荧光方案的PCR仪17万美元。
六、基因
人的DNA中解析出来的ATCG数据可以达到240g。三个atcg序列决定一个氨基酸,氨基酸组成蛋白质。
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