相机曝光与增益
其中 曝光 和 增益 是直接控制传感器(CCD/CMOS)上读出来的数据,是要优先调节的,以调节曝光时间为主。
不过曝的前提下,增加曝光时间可以增加信噪比,使图像清晰。软件上有个选项可以把过曝的区域显示出来。
当然,对于很弱的信号,曝光也不能无限增加,因为随着曝光时间增加,噪音也会积累。所谓冷CCD就是靠降温减少噪音,从而可以长时间曝光拍摄弱信号。
增益一般只是在信号弱,但不想增加曝光时间的情况下使用。一般相机增益都产生很大噪音的,所以几乎不怎么用,当然,EMCCD另说了。
饱和度就是色彩饱和度,这是彩色相机特有的,比如这个leica的彩色相机你如果选灰度模式就没有饱和度这个选项了。对于荧光照片,改饱和度相当于给单色灰度图加不同的伪彩,不影响荧光强度定量(当然,定量的话不建议用彩色模式)
伽玛 ,如3楼所说,按幂函数对亮度值重新分布,伽玛就是指数。伽玛大于1使亮的更亮暗的更暗,可以抹掉一些弱信号;小于1则相反可以让较弱信号显示出来
饱和度 伽玛 是对读出来的图像进行的变换,其实和用ipp photoshop等软件调是一样的,只是后期对显示效果的调节。但要注意的是面向常规应用的采集软件一般是在线调节,然后直接把调节后的结果保存为输出的图像,这是为应用上方便考虑的,省得采完图再去用其它软件调了。高端采集软件则会保存原始数据,把调节信息单独保存。这类似单反相机输出RAW还是JPEG格式的区别。
一楼贴的第二张图是自动曝光的界面,设置亮度,软件自动调节曝光时间,可以防止过曝。但定量时千万不要用自动曝光,要不然全乱套了。
一般来说不推荐用彩色相机拍摄荧光,一是因为彩色相机光效率和动态范围低,另生成的彩色图像给定量带来麻烦(RGB图像要定量荧光强度,必须先转换为HSI之类颜色空间,然后把Hue, Saturation丢掉)。但是有时受条件所限,用彩色相机也是可以的,定量的话建议用相机的灰度模式(我记得leica有这个模式的)。