DNA | RNA | Protein | 提取 | 纯化 | 定量

 

这算是wet lab实验室最为基本的技能了。

基因克隆，从Ecoli里提取质粒，不要忘了加RNase，否则在做gateway cloning的时候RNA会抑制LR反应。

不同用途的实验对DNA、RNA、Protein的纯度要求是不一样的，这你要自己去摸索，比如普通Lentivirus packaging，Plasmid里混杂了RNA就没那么重要。

 

这里先说下DNA和RNA的定量。

分光光度计 260/280 260/230 比值所代表意义

 

A260nm是核酸最高吸收峰的吸收波长

A280nm, A270nm是蛋白最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估

A230nm是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯 DNA 和 RNA 的 A260/A230 比值为2.5。若比值小于 2.0 标明样品被碳水化合物（糖类）、盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。

切胶后，A260/280=2，说明无蛋白污染；A260/230=0.2，说明样品被碳水严重污染，

解决办法：用washing buffer（含酒精那个）多洗几遍就好了，亲测有效。用ddH20 elution，不要用NE buff。

 

超详细Nanodrop结果判读！（下）——A260/A280与A260/A230比值偏高怎么办？

切胶回收后的质粒进行检测时为什么波峰一直出现在A230，而非A260？