Lentiviral titer | 慢病毒浓度滴定 | 载体

 

载体病毒的质量至关重要，如果活性太弱，那DNA、RNA等就无法被被成功递送到细胞内，整个系统就不会工作了。

所以很多细胞基因治疗方案的瓶颈就在于载体。

 

在实验室里，我们一般用Lentivirus，其容量大、活性高、整合到genome表达稳定。

Lentivirus最好是现做现用，因为lab protocol比较成熟，所以titering就被跳过了，最终用antibiotic筛的时候就能大致估算出titer。

Lentivirus不能放在室温或者4度、20度，即使冻在-80度，其活性也只能维持几周。

 

Tips for Titering Your Lentiviral Preps - By Meghan Rego

两种滴定方式：

• Physical titer
• Functional titer

 

如果做大实验，比如CRISPR screen或者Perturb-seq，还需要确保以下两点：

• high titered Lentivirus - concentrate浓缩病毒
• even distribution virus prep - 使用电击渗透效率可达80%（不要污染我们lab的lonza），不要使用低效的heat shock（10%）