Lentiviral titer | 慢病毒浓度滴定 | 载体
载体病毒的质量至关重要,如果活性太弱,那DNA、RNA等就无法被被成功递送到细胞内,整个系统就不会工作了。
所以很多细胞基因治疗方案的瓶颈就在于载体。
在实验室里,我们一般用Lentivirus,其容量大、活性高、整合到genome表达稳定。
Lentivirus最好是现做现用,因为lab protocol比较成熟,所以titering就被跳过了,最终用antibiotic筛的时候就能大致估算出titer。
Lentivirus不能放在室温或者4度、20度,即使冻在-80度,其活性也只能维持几周。
Tips for Titering Your Lentiviral Preps - By Meghan Rego
两种滴定方式:
- Physical titer
- Functional titer
如果做大实验,比如CRISPR screen或者Perturb-seq,还需要确保以下两点:
- high titered Lentivirus - concentrate浓缩病毒
- even distribution virus prep - 使用电击渗透效率可达80%(不要污染我们lab的lonza),不要使用低效的heat shock(10%)