细胞系培养

大致步骤

传代

293T为例

• 试剂准备：胰酶，全培养基，\(ddH_2O\)，放置在水浴锅\(37^。\)。
• 在无菌dish内加入适量（5ml）培养基，做好标签（细胞系，传代数，时间），以作后续使用。
• 从培养箱中取出细胞，用枪吸除培养基，再加入\(ddH_2O\)清洗一次，尽可能去除死细胞。
• 加入适量（1ml）胰酶，混匀，放入培养箱内，等待1~5min（视细胞情况，确保细胞解离）。
• 加入3倍于胰酶量的全培养基（含血清终止胰酶作用），混匀，并使用移液枪吹打dish表面，使细胞充分解离。
• 将混合液加入试管，离心（，5min），弃去上清液。
• 在试管内加入（1 * n个dish）ml 全培养基，混匀，按1：3/4的比例加入备好的培养基内，传代培养。

冻存

上述传代过程中产生多余的细胞可进行冻存。冻存前要检测细胞活力值（即单位体积内活细胞与死细胞的比例），一般要保证比例大于90%，且单位ml内活细胞数目达到\(1 * 10^6\)以上。

• 对上述待冻存细胞悬液进行活力值检测，按细胞悬液：台盼蓝=1：1，混匀。
• 试剂准备：胎牛血清PBS（水浴锅37°）：DMSO（黑暗保存）=9：1，配置冻存液。
• 将细胞悬液在保证每份冻存管内的密度达到\(1 * 10^6\)以上条件下，分装到冻存液中。

细胞生长曲线

• 计算细胞总数， 调整细胞至一定浓度（\(1×10^5\)/ml）。
• 细胞再培养，准备24孔板，每孔中加入0.1ml的细胞（即\(1×10^4\)个细胞）和0.9ml的细胞培养基，轻轻晃动孔板（十字方向晃动），使细胞分布均匀，并进行常规细胞培养（48h后换液培养）
• 培养48h后，即可每过24h取样一次，每次取样至少取3个孔的细胞，多次计数取平均值，提高准确性），取样细胞常规胰蛋白酶消化，制备单细胞悬液，进行细胞计数。
• 计数结果，以时间（d）为横坐标，细胞数为纵坐标，绘制细胞生长曲线