蛋白质印迹法（免疫印迹试验，Western Blot）
蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即 Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。
其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
蛋白免疫印迹（Western Blot）是将电泳分离后的细胞或组织中蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术，现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。
一提起Western blot，大家会不禁联想到Southern blot和Northern blot。其实它们的名字也是个有趣的故事。1975年，Edwin Southern教授发明了DNA杂交检测技术，故命名为Southern blot。之后，James Alwine、David Kemp和George Stark三位教授又发明了RNA杂交检测技术，因与Southern blot相似，故命名为Northern。George Stark这位牛人教授在两年后又开发出类似的蛋白质检测方法。1981年，Neal Burnette将其命名为Western blot。为什么当时没叫Eastern blot呢？这无从考证，不过科学家们还真是挺有创意的。
30年来， Western blot技术已成为蛋白质研究中最常用的工具。它的标准流程如下：蛋白质首先通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，再通过电泳转移到固相支持物上，固相支持物包括硝酸纤维素膜、PVDF膜和尼龙膜。首先将膜上未反应的位点封闭起来，以抑制抗体的非特异性吸附，这样固定的蛋白质即可与特异性的多克隆或单克隆抗体相互作用。最后通过放射、生色或化学发光的方法进行定位。
Western Blot原理与Northern Blot、Southern blot类似。三种方法都采用电泳来分离样品，然后将样品转移到稳定的膜上并随后进行探测。Western Blot法采用的是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（也称为SDS-PAGE），被检测物是蛋白质，"探针"是抗体，"显色"用标记的二抗。
具体而言，Western
Blot使用SDS-PAGE按蛋白大小分离蛋白质样品，将其转移到硝酸纤维素薄膜上，分别用一抗、二抗来孵育硝酸纤维素膜，形成蛋白质—第一抗体—第二抗体—酶复合物。然后用信号分子（显色，化学发光或荧光）直接检测抗体，或用标记的二抗间接检测抗体。
样本准备--电泳--转移到膜上--染色
图中一定会有一列，一般在最左、最右、或中间，像梯子一样的，那个是marker，是用来指示条带大小的，在每一个条带边都会有具体大小的注释。marker的每个条带对应的同一水平位置分子量大小一致。
除这一列以外的条带都是样品。将样品条带所处的水平位位置与marker的各个条带位置比较，可用于估计样品的分子量。
确定的条件下，带电粒子在单位电场强度作用下，单位时间内移动的距离（即迁移率）为常数，是该电泳图谱带电粒子的物化特征性常数。不同带电粒子因所带电荷不同，或虽所带电荷相同但荷质比不同，在同一电场中电泳，经一定时间后，由于移动距离不同而相互分离。分开的距离与外加电场的电压与电泳时间成正比。
在外加直流电源的作用下，胶体微粒在分散介质里向阴极或阳极作定向移动，这种现象叫做电泳。利用电泳现象使物质分离，这种技术也叫做电泳。胶体有电泳现象，证明胶体的微粒带有电荷。各种胶体微粒的本质不同，它们吸附的离子不同，所以带有不同的电荷。
①通过 SDSPAGE 凝胶电泳检测 cfp10 基因在受体菌 BL21(DE3)plysS 中的表达,从图中可看出, 与诱导前相比在大约 10 ku 左右的位置有更多的蛋白表达。
②从图中不同诱导条件下的表达结果可看出在 0. 2 mmol /L IPTG 诱导 2 h 的条件下目的蛋白有明显表达。
REF
http://www.ebiotrade.com/custom/ebiotrade/zt/120412/
https://baike.baidu.com/item/%E8%9B%8B%E7%99%BD%E8%B4%A8%E5%8D%B0%E8%BF%B9%E6%B3%95/5560390?fromtitle=Western%20Blot&fromid=9884710&fr=aladdin
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https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/37965618
