MestReNova图谱分析

  一、MestReNove基础设置及便捷操作       

view(视图)中

　　勾选Pages显示左侧页面。

　　勾选Data Browser显示文件库，可移至右侧，导入文件，方便查看。一般都是打开1r文件即可。

　　点击Shortcuts可查看快捷键。

　　勾选Spectrum Toolbar（打开1r文件之后），右侧显示基本操作，里面包含放大缩小，全谱，移动等功能，可以尝试使用快捷键简便操作。其中放大功能可以从左向右滑动放大选定区域。

　　鼠标放在图谱空白区域滑动滚轮，图谱的纵坐标放大或缩小。

 

  二、NMR图谱操作        

  2.1 图谱预处理        

　　在processing（处理）中进行基线校正和相位校正。

（1）图谱放大后基线不平时可以进行基线校正    

　　Auto Baseline Correction——自动基线校正

基础设置：点击Auto Baseline Correction处下拉菜单中的Baseline Correction…（基线校正…）

　　方法推荐Bernstein  Polynomial Fit 拟合方法（伯恩斯坦多项式拟合，第三个）。

　　点击图标或者全自动（Full Auto )将自动按照设置的方法进行校正。

（2）若图形相位不好，左右扭曲，可以进行相位校正       

　　1、Auto Phase Correction——自动相位校正（建议使用）   

基础设置：点击Auto Phase Correction处下拉菜单中的Options（选项）。

　　　　  针对一维氢谱，建议勾选G lobal（全局）,Regions（范围）,取消勾选Selective（选择性的，碳谱谱图可勾选 ）。

　　2、Manual Correction——手动相位校正        

　　针对自动相位校正不理想的情况下，可以进行手动相位校正。

　　点击手动校正——点击右侧蓝色区域，会在最高最主要的一个信号上面出现一条浅蓝色的竖线，作为一个支点——将鼠标放在蓝色区域，按着鼠标的左键不动，上下移动鼠标，使蓝色竖线左右相位对称，对于其他距离蓝色竖线较远的地方，按着鼠标的右键不动，上下移动鼠标进行调整。调整结果仍不好时，可以移动蓝色竖线以其他信号作为支点进行调整。 

  2.2 图谱分析           

　　在Analysis（分析）中进行定标，标识和积分。

（1）步骤一：Reference（参考）——定标      

　　对于一张氢谱，通常情况下是需要进行定标的。一般使用TMS或者其他溶剂进行定标。

　　查看谱图的溶剂型号：在View（视图）中勾选Parameters，Parameters窗口中的Solvent项目显示溶剂型号。

  

 

　　查看溶剂的标准化学位移：若化学位移0附近有明显的信号，可以使用TMS(化学位移等于0）进行定标。若其他溶剂的标准化学位移未知，可点击修正窗口中的Solvents（溶剂）查看对应的化学位移再进行定标。

具体操作：

　　1、放大需要定标的信号

　　2、点击Reference（参考）图标

　　3、将鼠标移动到对应信号上面（自动锁定顶点)，点击左键，显示修正窗口

　　4、将New Shift修改为标准化学位移。

　　若溶剂峰的标准化学位移未知，可点击修正窗口中的Solvents（溶剂），查找溶剂的标准化学位移。

　　比如，要使用DMSO进行定标，选择DMSO的大致信号点（2.5ppm附近），点击修正窗口中的Solvents（溶剂），在其中找到DMSO的标准唯一，单击，点击OK进行定标。

（2）步骤二：Peaks（峰）——标记化学位移        

基础设置：点击Options（选项）图标，Method（方法）建议选择GSD（在标记化学位移时，软件还会对整张谱图进行全谱去卷积分析，信号中会出现蓝色线条，就是全谱去卷积拟合的结果，标记的化学位移值是以拟合的信号为准）。若不需要拟合出来的线，取消勾选Peak Curves。

　　勾选Auto Classify（自动分类），系统会自动区分化合物的信号和杂质的信号，将杂质的信号标红，同时在积分时剔除出去。

 

在具体标记化学位移时，有以下几种操作：

　　1、Auto Peak Picking——自动标记化学位移

　　点击Auto Peak Picking，系统会自动标记整张谱图的化学位移，其中红色是溶剂峰标识，但标记的数量太多，有很多没用的峰，不适用。

　　2、Manual Threshold——手动设置阈值

　　使用鼠标向上滚动，能更加容易清晰观察到有哪些是杂质比较低的信号，有哪些是需要的溶剂的信号。

　　点击Manual Threshold，把鼠标放在左侧，按着鼠标左键向右下角拖动，框选所有需要标记的信号（粉色区域），松开鼠标，软件会把处在粉色区域及以上的信号标记上化学位移，下方白色区域的小幅信号不标记。

　　使用右侧工具栏中的放大工具查看标峰情况。经过手动设置阈值标记后，若仍有部分信号未标记上，可以点击Pick by Pick（逐个标峰)，一个个进行手动标记。若有不明显的峰不需要标记，可以点击Delete Manually（手动删除）删除不需要的化学位移。

 

 

　　3、Peak by Peak——逐个标峰（建议使用）

　　由于我们所研究的物质是已知的，一般使用核磁氢谱来验证我们的产物。因此可以在网上查找所研究物质的核磁氢谱长啥样，与自己的谱图进行对比，手动标记出物质氢原子对应的峰。

核磁共振氢谱标准谱图查找方法：

　　1、使用chemdraw绘制化合物，点击菜单栏中Structure-Predict H-NMR Shifts进行核磁氢谱预测（不够准确）

　　2、在网上搜索化合物的核磁共振氢谱图，比如https://www.chemicalbook.com/。

　　3、通过scifinder等学术文献查找工具查找标准谱图。

删除操作:

　　点击Delete All(全部删除），删除所以标记的化学位移。

　　点击Delete Manually（手动删除），手动删除不需要的化学位移。

其他操作：

　　点击NMR Peaks Table,显示一个表格，其中包含了所以标记的化学位移，并且对其进行归类，显示是杂质还是溶剂峰。

　　取消勾选Peak Curves，不显示GSD拟合的信号（蓝色线条）。

　　取消勾选Peak Labels，不显示标记的化学位移值。

 

（3）步骤三：Multiplets（多重峰分析）或 Integration——积分    

基础设置：点击Options，Calculation Method（积分计算方法）建议选择Peaks。

　　Sum积分方法计算信号线下的总面积（与GSD拟合结果无关），移动积分范围，积分值会改变。

　　Peaks积分方法将拟合出来的单峰面积相加（与GSD拟合结果有关），可以将信号进行拆分，移动积分范围，积分值不变。

　　1、Auto Multiplet Analysis——自动多重峰分析(建议使用）

　　多重峰分析不仅仅可以进行积分，自动做归一化，还可以判定峰的类型，标记最高峰的化学位移，并自动计算峰的耦合常数。

　　点击Auto Multiplet Analysis，自动对每一个信号进行多重峰分析（排除水和溶剂峰信号）。

　　归一化：将鼠标移到可判断出氢原子个数的信号处，双击该信号的多重峰分析结果（矩形框，积分值，积分线），弹出多重峰分析管理窗口，将积分改为已知的氢原子个数。

　　若需要对分析结果进行人为修改，可以双击信号的多重峰分析结果（矩形框，积分值，积分线）可对其进行修改。弹出的多重峰分析管理器会显示峰的所有信息，对于多重峰，存在耦合常数，点击Simulate Multiplets，软件可以根据得到的数据画出一个信号，与实际信号进行比较，用以检查。

　　点击Manually，对图谱进行手动积分。

　　点击NMR Multiplets Table，显示多重峰分析结果，可导出。

　　取消勾选Multiplet Labels，不显示多重峰分析得到的矩形框。

　　取消勾选Multiplets，不显示积分值。

　　取消勾选Multiplet Curves，不显示积分线。

　　2、Auto Integration——自动积分

　　仅能进行简单的积分，操作与标记化学位移类似。

 

  三、图谱美化            

　　右键点击属性（Properties）选项，弹出属性窗口，

（1）Genera（一般）  

　　背景：颜色——黑色

　　透明度——0%

　　取消勾选Title，不显示标题

　　Title中可设置字体，格式，位置，对齐方式和偏移

 

（2) Grid（网格）  

　　取消勾选Show Horizontal，Show Vertical，不显示横纵表格。

　　取消勾选Show Frame，不显示边框

　　取消勾线Show Baseline，不显示基线

　　当勾选Show Over时，可以设置显示线条的颜色和宽度。

 

（3）1D（一维谱图显示）   

　　设置谱线样式——线，颜色——栗色，线宽（电脑显示建议5，打印建议黑色1.0）

 

（4) Scales（比率)      

　　可以设置横纵坐标的颜色——黑色，线宽——5，字体——Arial或者Times New Roman，B，10号，谱图距离横坐标的距离——0。

　　一维谱图一般不显示纵坐标。

　　横纵坐标可以设置标签，单位——ppm，最大小数位——6，初级尺寸——s，中级尺寸——1，位置——底部。

 

  

（5）Peaks（标峰） 

　　可以设置线的宽度——5，颜色(取消勾选Use Curve Color）——深蓝色，字体的样式——Arial，B，10号，数字单位——ppm，小数——2，标记的位置——Peak Groups（峰（拥簇））

　　在Visibility中Visible的下拉菜单中勾选Compound和Solvent（仅显示化合物和溶剂的化学位移）

  

（6）Integrals（积分）

　　 略

（7）Multiplets Integrals（多重峰分析）

　　可以设置矩形框字体样式，背景，线宽，标签，小数点位数，积分地方距离横坐标距离，（勾选J’s Tree（偶合树）会显示明显裂分信号的偶合方式）。

　　设置下方积分值处的颜色——深绿，线宽——5，字体——a，B，10号，navy深蓝色，小数位数——2，显示位置——线段上，显示方式——垂直，Range中的Margin处可设置积分值距离基线的距离——3%。

　　设置上分积线的位置——25%，最大高度——40%。

 

　　点击左下角Set  as Default，设置成默认。

 （8）谱线高度       

　　用移动键将谱图基线移到适当高度了，积分数值位于基线下方。

　　滑动滚轮，将谱谱线高度移至页面一半以下。

　　用放大功能在包含所以峰的同时将谱图尽可能放大（0-10ppm）

　　导出为pdf文件。

 

  四、调取相关信息        

View中：

　　Tables中可以调取多重峰分析结果

　　勾选Parameters，显示谱图相关的原始信息（参数），可以在Customize自定义显示的信息

 

  五、其他操作          

　　Molecule处可以专门画结构，或用Chemdraw画图。

　　通过局部放大可以构建局部的另一副谱图

　　将整个页面作为一个模版可以点击View视图中的Layout Templates下的创建输出模版文档，同时可在此图标下粘贴模版。

 

第一次使用设置好基础选项后，对图谱分析基本流程：

　　导入图谱——自动基线校正——自动相位校正——查找溶剂型及其化学位移——定标——根据标准图谱逐个标峰进行定标——自动多重峰分析——归一化——图形美化——导出。