酵母单杂交 (Y1H) 试验
- 1.叶绿素荧光参数:Fv/Fm反映植物的潜在最大光合能力
2. 酵母单杂交:是研究DNA与蛋白质之间的关系
将编码待测蛋白和AD的融合载体导入细胞,如果靶蛋白与顺势作用元件结合,那么报告基因表达。
诱饵是启动子,想找上游调控蛋白,猎物是蛋白
将编码待测蛋白和AD的融合载体导入细胞,如果靶蛋白与诱饵结合,那么报告基因表达。
3.motif:真核生物基因在无转录因子时处于不表达状态,只有转录因子结合到识别DNA序列上后,基因表达。转录因子结合在基因的启动子区域,启动转录。
转录因子的结合位点:与转录因子结合的DNA(motif)
4.单杂交筛选应用(pAbAi 体系)
单杂原理:诱饵序列克隆到pAbAi 载体形成pBait-AbAi,通过同源重组整合到Y1Hgold 基因组上,当猎
物蛋白与诱饵发生互作后,会激活重组酵母菌AbAr基因的表达,使酵母菌对金担子素产生抗性,以此来
筛选互作蛋白。金担子素A(AureobasidinA,AbA)是从丝状真菌Aureobasidium pullulans No.R106 中分离出来的环
酯肽类抗生素,具有很强的抗真菌能力。
5.酵母选择性营养缺陷型培养基